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EML4-ALK基因融合位点的结构分析和TNF-α基因-308位点单核苷酸多态性与肺癌相关性进行研究.pdf
目的目前肺癌是人类常见的恶性肿瘤之一，在中国因肺癌死亡人数已经居于癌症死亡率首位。非小细胞肺癌（NONSMALLCELLLUNGCANCER，NSCLC约占所有肺癌的80％85，其中约2530就诊时已是疾病晚期，约4050已有远处转移，因而失去最佳手术切除机会，全身化疗及放疗是其主要的治疗手段。目前，以铂类为基础联合第三代抗肿瘤药物吉西他滨、长春瑞滨、紫杉类药物等的化疗方案是晚期NSCLC的标准治疗方案，但化疗有效率也仅为3040，并且很多患者出现呕吐，脱发等严重副反应，难以耐受。近年针对EGFR和KRAS等突变靶点研究一直火热，并涌现出许多针对EGFR靶点的药物，疗效显著。2007年日本学者SODA等首次发现EML4ALK棘皮动物微管相关蛋白样4间变性淋巴瘤激酶融合基因，研究发现其与EGFR和KRAS的突变可能存在不共存现象,提示该基因可能是非小细胞肺癌特异性较高的又一分子靶点。目前针对EML4ALK基因的融合位点结构研究较少，而其融合机制仍不清楚。本课题的研究目的在于通过对H2228细胞株中EML4ALK融合基因的融合位点的结构分析，初步探讨EML4ALK基因的融合方式和可能的融合机制。同时，我们亦通过对正常人群和原发性肺癌患者人群中肿瘤坏死因子Α（TNFΑ）基因308位点单核苷酸多态性的检查，初步对TNFΑ基因308位点单核苷酸的多态性与原发性肺癌相关性进行研究。方法本课题分为两部分第一部分采用巢式PCR扩增EML4ALK融合基因并对扩增产物进行测序，然后进行序列拼接，进一步应用NCBIBIASTNATIONALCENTERFORBIOTECHNOLOGYINFORMATION及CENSOR系统分析该基因融合位点的序列结构和发生融合的可能机制。第二部分应用高通量TAQMANMGB探针技术对TNFΑ308G/A位点，即RS1800629位点进行基因分型，分析比较447例健康对照者和250例原发性肺癌患者的基因类型。采用SPSS180软件对数据资料进行统计分析。结果1通过对融合基因的分析，发现在断裂点附近存在三个ALU重复序列，并发现ALK序列断裂点附近存在MIR序列。断裂点周围存在大量正向重复序列CTGT,及X元件的互补序列CCAGC，这些序列有可能促进DNA断裂和末端接合，并激发附近ALU序列的重组,并发现两个SNP位点。2分析结果显示TNFΑ308位点基因多态性在病例组和对照组中的分布频率具有统计学意义，（P＜005）。其中，A/G基因型在男性、吸烟/非吸烟、小细胞或非小细胞肺癌患者中相对于GG型均为危险因素。结论1H2228细胞系融合基因EML4ALK融合序列中存在ALU重复序列及MIR序列和大量热点序列CTGT和CCAGC，均可能与其融合机制相关，有待进一步探讨。2TNFΑ308G/A位点基因多态性与中国原发性肺癌发病易感性显著相关。
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